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淺談分子生物學(xué)實(shí)驗室設計要點(diǎn)

四川華銳凈化 2019-04-07 21:56:09 閱讀

在進(jìn)行植物組織培養工作之前,首先應對工作中需要哪些最基本的設備條件有個(gè)全面的了解,以便因地制宜地利用現有房屋,或新建、改建實(shí)驗室。實(shí)驗室的大小取決于工作的目的和規模。以工廠(chǎng)化生產(chǎn)為目的,實(shí)驗室規模太小,則會(huì )限制生產(chǎn),影響效率。

在設計實(shí)驗室時(shí),應按組織培養程序來(lái)沒(méi)計,避免某些環(huán)節倒排,引起日后工作混亂。植物組織培養是在嚴格無(wú)菌的條件下進(jìn)行的。要做到無(wú)菌的條件,需要一定的設備、器材和用具,同時(shí)還需要人工控制溫度、光照、濕度等培養條件。

實(shí)驗室設計原則:保證無(wú)菌操作,達到工作方便,防止污染。

實(shí)驗室組成:化學(xué)實(shí)驗室、洗滌菌室、無(wú)菌操作室(接種室)、培養室、細胞學(xué)實(shí)驗室、其他小型儀器設備。

1) 化學(xué)實(shí)驗室(準備室):完成所使用的各種藥品的貯備、稱(chēng)量、溶解、配制、培養基分裝等。
主要設備:藥品柜、防塵櫥(放置培養容器)、冰箱、天平、蒸餾水器、酸度計及常用的培養基配制用玻璃儀器。

2) 洗滌、滅菌室:完成各種器具的洗滌、干燥、保存、培養基的滅菌等。
主要設備:水池、操作臺、高壓滅菌鍋、干燥滅菌器(如烘箱)等。

3) 無(wú)菌操作室(接種室):主要用于植物材料的消毒、接種、培養物的轉移、試管苗的繼代、原生質(zhì)體的制備以及一切需要進(jìn)行無(wú)菌操作的技術(shù)程序。
主要設備:紫外光源、超凈工作臺、消毒器、酒精燈、接種器械(接種鑷子、剪刀、解剖刀、接種針)等。

接種室宜小不宜大,一般7~8平米,要求地面、天花板及四壁盡可能密閉光滑,易于清潔和消毒。配置拉動(dòng)門(mén),以減少開(kāi)關(guān)門(mén)時(shí)的空氣擾動(dòng)。接種室要求干爽安靜,清潔明亮。在適當位置吊裝1~2盞紫外線(xiàn)滅菌燈,用以照射滅菌。最好安裝一小型空調,使室溫可控,這樣可使門(mén)窗緊閉,減少與外界空氣對流。接種室應設有緩沖問(wèn),面積1m2為宜。進(jìn)入無(wú)菌操作室前在此更衣?lián)Q鞋,以減少進(jìn)出時(shí)帶入接種室雜菌。緩沖間最好也安一盞紫外線(xiàn)滅菌燈,用以照射滅菌。

4) 培養室:培養室是將接種的材料進(jìn)行培養生長(cháng)的場(chǎng)所。培養室的大小可根據需要培養架的大小、數目、及其他附屬設備而定。其設計以充分利用空間和節省能源為原則。

分子生物學(xué)實(shí)驗室
 
 
分子生物學(xué)實(shí)驗室設計

分子生物學(xué)實(shí)驗室PCR
PCR實(shí)驗室并沒(méi)有嚴格的凈化要求,但是為避免各個(gè)實(shí)驗區域間交叉污染的可能性,宜采用全送全排的氣流組織形式。同時(shí),要嚴格控制送、排風(fēng)的比例以保證各實(shí)驗區的壓力要求。

1.試劑貯存和準備區:該實(shí)驗區主要進(jìn)行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應混合液的制備。試劑和用于標本制作的材料應直接運送至該區,不得經(jīng)過(guò)其他區域。試劑原材料必須貯存在本區內,并在本區內制備成所需的貯存試劑。 對與氣流壓力的控制,本區并沒(méi)有嚴格的要求。

2.標本制備區:該區域主要進(jìn)行的操作為臨床標本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定RNA時(shí)cDNA的合成。 本區的壓力梯度要求為:相對于鄰近區域為正壓,以避免從鄰近區進(jìn)入本區的氣溶膠污染。另外,由于在加樣操作中可能會(huì )發(fā)生氣溶膠所致的污染,所以應避免在本區內不必要的走動(dòng)。

3. 擴增反應混合物配制和擴增區:該區域主要進(jìn)行的操作為DNA或cDNA擴增。此外,已制備的DNA模板和合成的cDNA(來(lái)自樣本制備區)的加入和主反應混合液(來(lái)自試劑貯存和制備區)制備成反應混合液等也可在本區內進(jìn)行。在巢式PCR測定中,通常在第一輪擴增后必須打開(kāi)反應管,因此巢式擴增有較高的污染危險性,第二次加樣必須在本區內進(jìn)行。 本區的壓力梯度要求為:相對于鄰近區域為負壓,以避免氣溶膠從本區漏出。為避免氣溶膠所致的污染,應盡量減少在本區內的不必要的走動(dòng)。個(gè)別操作如加樣等應在超凈臺內進(jìn)行。

4.擴增產(chǎn)物分析區:該區域主要進(jìn)行的操作為擴增片段的測定。如使用全自動(dòng)封閉分析儀器檢測,此區域可不設。 本區是最主要的擴增產(chǎn)物污染來(lái)源,因此對本區的壓力梯度的要求為:相對于鄰近區域為負壓,以避免擴增產(chǎn)物從本區擴散至其它區域。

5.完備的實(shí)驗室配套設施:完備的實(shí)驗室配套設施是保證實(shí)驗工作的必要條件,應根據各個(gè)實(shí)驗室實(shí)驗內容的不同配備相應的設備和儀器,如超凈工作臺、生物安全柜、離心機、加樣器等。

 

 

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