根據《臨床檢驗擴增檢驗實(shí)驗室管理暫行辦法》，制定本標準
一、 臨床基因擴增檢驗實(shí)驗室區域設置原則    
 （一） 臨床基因擴增檢驗實(shí)驗室區域設置原則    
1、 試劑儲存和準備區     
2、 標本制備區
3、 擴增反應混合物配制和擴增區     
4、 擴增產(chǎn)物分析區      
如使用全自動(dòng)分析儀，區域可適當合并。      
（二）各工作區域必須有明確的標記，避免不同工作區域內的設備、物品混用。    
（三）進(jìn)入各工作區域必須嚴格按照單一方向進(jìn)行，即試劑儲存和準備區 —>標本制備區—>擴增反應混合物配制和擴增區—>擴增產(chǎn)物分析區。      
（四）不同的工作區域使用不同的工作服（例如不同的顏色）。工作人員離開(kāi)各工作區域時(shí)，不得將工作服帶出。     
二、 工作區域儀器設備配置標準    
 （一） 試劑儲存和準備區     
1、2-8C和-15C冰箱     
2、混勻器      
3、微量加樣器（覆蓋1-1000ul）     
4、移動(dòng)紫外燈（近工作臺面）      
5、消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）    
 6、專(zhuān)用工作服和工作鞋    
 7、專(zhuān)用辦公用品     
（二） 標本制備區     
 1、2-8C冰箱、-20C或-80C冰箱   
2、高速臺式冷凍離心機     
3、混允器      
4、水浴箱或加熱模塊     
 5、微量加樣器（覆蓋1-1000ul）    
 6、可移動(dòng)紫外燈（近工作臺面）     
7、超凈工作臺      
8、消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）     
9、專(zhuān)用工作服和工作鞋     
10、專(zhuān)用辦公用品      
如需處理大分子DNA，應具有超聲波水浴儀。    
（三） 擴增反應混合物配制和擴增區
 1、 核酸擴增儀      
2、 微量加樣器（覆蓋1-1000ul）     
3、 可移動(dòng)紫外燈（近工作臺面）      
4、消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）     
5、 專(zhuān)用工作服和工作鞋     
6、 專(zhuān)用辦公用品     
(四)擴增產(chǎn)物分析區      
視檢驗方法不同而定?；緝x器設備如下：     
1、 微量加樣器（覆蓋1-1000ul）     
2、 可移動(dòng)紫外燈（近工作臺面）      
3、消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、加樣器吸頭（帶濾心）     
4、 專(zhuān)用工作服和工作鞋     
5、 專(zhuān)用辦公用品      
為了對以個(gè)特定序列進(jìn)行PCR做重復檢測,需要三個(gè)不同的區域,每一個(gè)區域的具體技術(shù)操作和試劑在下面詳細列出.     
1、 樣品準備區      
這個(gè)區域專(zhuān)門(mén)用作樣品的準備，在制備和操作用于核酸提取的試劑時(shí)應該采     
取預防措施：      
1）PCR產(chǎn)物和帶有要擴增序列的DNA克隆不能在這個(gè)房間操作。     
 2）組織培養物、組織標本和血清樣品都帶進(jìn)樣品準備間處理，以根據應用的需要提取DNA或RNA。      
3）用于樣品處理的工具不能被用作普通分子克隆的工具，也不能用作操作靶序列。     
4）DNA樣品應該用有專(zhuān)門(mén)的防護或正壓活塞式移液管操作，以防止在吸取樣品時(shí)有氣溶膠遺留。      
5）大體積樣品應該用單獨包裝的無(wú)菌一次性移液管吸取。      
6）管子打開(kāi)前都要簡(jiǎn)短離心以減少氣溶膠的產(chǎn)生，而且管子不能用力崩開(kāi)，這樣會(huì )產(chǎn)生氣溶膠。      
7）任何時(shí)候都應該穿實(shí)驗服和帶手套，手套要經(jīng)常更換，尤其在抽提過(guò)程中每一步之間都要更換。實(shí)驗服要專(zhuān)門(mén)用于樣品準備間，經(jīng)常清洗。     
2、樣品準備和RNA-PCR
      RNA-PCR的額外步驟需要額外的樣品操作，這樣增加了樣品之間污染的機會(huì )。為了避免這一問(wèn)題，反轉錄一步可以在樣品準備區進(jìn)行。在RNA-PCR中應用UNG以防止污染的方法也有報道。     
3、前PCR區      
必須有專(zhuān)門(mén)用于準備各種反應的區域，這個(gè)區域必須保持干凈，而且沒(méi)有來(lái)自克隆和樣品準備的污染。前PCR區必須要有試劑和準備，特別是專(zhuān)門(mén)用于前PCR區的正壓活塞式移液管。      
4、PCR實(shí)驗室試劑的操作      
1）所用的所有溶液都應該沒(méi)有核酸和（或）核酸酶（DNase和RNase）污染。     
2）所有PCR試劑中使用的水都應該是高質(zhì)量的－新鮮蒸餾的去離子水，用0.22μm過(guò)濾的，并且是高壓滅菌。      
3）在20℃到25℃貯存的試劑建議加點(diǎn)像疊氮鈉一類(lèi)的抗微生物劑，在擴增試劑或樣品制備試劑中加入0.025%的疊氮鈉不抑制擴增反應。     
4）所用試劑都應該以大體積配制，實(shí)驗一下看試劑是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量進(jìn)行貯存。      
5）所有試劑和樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的瓶子和管子。     
6）新配制的試劑在用于準備新的標本之前應該加以檢驗。      
7）樣品準備和前PCR區所使用的移液管在不使用時(shí)都應該小心保存。     
5、在前PCR區建立PCR混合物      
1）可以把即刻可用的“主混合物”溶液配好、分裝并保存在-20℃或4℃，在實(shí)驗室只涉及到擴增一種或少數幾種特異序列時(shí)這樣做很有用。      
2）如果你的實(shí)驗室使用多套引物，以致于配制包括所有試劑的單一反應混合物不夠經(jīng)濟，可以考慮分裝保存夠一天的PCR成分。      
3）作為一個(gè)規則，應該保存一套陰性、弱陽(yáng)性和強陽(yáng)性對照樣品來(lái)分析樣品配制和PCR前過(guò)程的效率和潔凈程度。而且，你也希望通過(guò)使用一個(gè)已知的弱陽(yáng)性樣品來(lái)驗證你的樣品緩沖液以證明里面不含擴增抑制物。      
4）陰性樣品要與每組樣品同時(shí)做，以分析是否存在樣品與樣品之間的污染以及是否存在PCR產(chǎn)物的污染，陰性對照應該包括核酸以外的所有試劑。      
5）當做陽(yáng)性對照時(shí)，有兩個(gè)理由決定了應該使用最少數量的核酸。     
6）由于必須有對照反應，對照模板的特點(diǎn)應該予以考慮。
6、控制污染的方法      
已設計出很有力的酶學(xué)方法用來(lái)消除一種形式的污染—使用UNG，這一技術(shù)能有效地消除由PCR產(chǎn)物引起的污染。另一種控制污染的方法是使用紫外線(xiàn)，這種方法不能完全消除污染問(wèn)題，但可以將污染降低幾個(gè)數量級。     
7、PCR儀的位置     
8、后PCR區      
PCR完成以后，需要分析樣品并解釋數據，應該留出一個(gè)專(zhuān)門(mén)用于反應后處理樣品的地方。后PCR活動(dòng)中使用的所用試劑、一次性耗材和儀器都必須是專(zhuān)門(mén)用于這一目的，決不能把實(shí)驗室這一區域的試劑或儀器用于任何前PCR活動(dòng)